奈玛特韦联合奥比他韦显著增强抗SARS-CoV-2活性：体外研究揭示协同机制与临床潜力

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奈玛特韦联合奥比他韦显著增强抗SARS-CoV-2活性：体外研究揭示协同机制与临床潜力（[size=1em]10.1016/j.antiviral.2024.105859）

随着COVID-19大流行进入“后疫情”阶段，抗病毒耐药问题正成为新挑战。英国卫生安全局（UKHSA）一项最新体外研究首次证实：将已上市丙肝药物奥比他韦（ombitasvir）与新冠明星药奈玛特韦（nirmatrelvir，Paxlovid活性成分）联用，可把奈玛特韦的抗病毒效力提升16倍，并完全阻断病毒子代产生。论文2024年3月在线发表于《Antiviral Research》，为破解耐药、降低剂量及延长“老药”生命周期提供了全新思路。

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一、研究背景：单药耐药警钟已敲响
奈玛特韦通过抑制SARS-CoV-2主蛋白酶（3CLpro）阻断病毒多蛋白切割，是目前处方量最大的口服抗新冠药物。然而2023年《Nature》报道，E166V、L50F、T21I等突变可在不影响病毒适应性的前提下，使奈玛特韦IC50升高100倍。因此，寻找“增效搭档”而非盲目加量，被视为保护这一“最后可口服防线”的关键策略。

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二、实验设计：384孔板里“海选”最佳拍档
团队在Calu-3人肺腺癌细胞中建立高通量细胞病变（CPE）模型，以0.5 MOI感染祖先株，72 h后测定ATP含量与结晶紫染色，评估10种临床阶段抗病毒药物的协同、相加或拮抗作用。

• 初筛28对组合：仅奈玛特韦+奥比他韦（平均HSA=13.1）、瑞德西韦+奈玛特韦（HSA=16.5）及莫努匹韦+卡莫司他（HSA=11.2）达到协同阈值（HSA>10）。
• 聚焦“黑马”奥比他韦：该药为丙肝NS5A抑制剂，此前被报道对SARS-CoV-2有弱活性，但机制未明。
  

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三、核心发现：16倍增效+病毒“清零”

• IC50折叠式下降
  单药奈玛特韦IC50为0.587 μM；加入10 μM奥比他韦后，IC50降至0.037 μM（↓16×），且对细胞无毒。
• 病毒滴度“3 log10”断崖
  48 h plaque assay显示：
  
  • 2.5 μM奈玛特韦单用降低病毒滴度2.74 log10；
  • 联合10 μM奥比他韦后，检测不到可存活病毒颗粒（>5 log10抑制）。
    
• 机制解析：正构+变构“双锁”3CLpro
  
  • 分子对接：奥比他韦因体积庞大被排斥于3CLpro活性腔，但以−9.47 kcal/mol高亲和力结合在正构位点上方变构口袋（Gln189为关键残基）。
  • 酶学实验：单药奈玛特韦IC50 0.327 μM；加入50 μM奥比他韦后，IC50降至0.107 μM（↓3×），证实正变构调节增强奈玛特韦结合稳定性。
  • 多靶点加成：奥比他韦还可轻度抑制病毒nsp14外切酶，削弱病毒“校对”功能，进一步提升整体抗病毒屏障。
    

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四、临床转化：剂量降、耐药难、前景广

• 暴露量差距：丙肝标准方案（Viekira Pak）含奥比他韦仅8.33 mg，Cmax≈0.65 μM，远低于体外最佳增效浓度（10 μM）。作者指出，需对NS5A骨架进行结构改造、降低血浆蛋白结合率，或开发吸入制剂以提高肺部浓度。
• 耐药预防：组合用药显著提高突变屏障，模拟计算显示，需同时出现3CLpro与NS5A结合位点双突变才可能耐药，概率极低。
• 跨病毒潜力：奥比他韦对SARS-CoV、MERS-CoV 3CLpro同源模型同样具有预测高亲和力，提示泛冠状病毒“老药新用”可能。
  

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五、结语：从“单打独斗”到“协同作战”
本研究首次提供实验级证据：奈玛特韦+奥比他韦通过“正构抑制+变构调节”双机制，实现对SARS-CoV-2的超高效抑制，为破解耐药、减少剂量、扩大治疗窗口提供了立即可行的开发路径。下一步，优化奥比他韦药代特征、开展动物体内验证及探索对其他RNA病毒（如流感、黄病毒）的增效作用，将成为把这一“实验室协同明星”推向临床的关键。